Открытый доступ ISSN: 1747-0862 Journal of Molecular and Genetic Medicine Review Article Volume 15:S1, 2021 Описание Введение: Цель этого обзора - определить эффективность перорального приёма Диоксида хлора для лечения COVID 19. Методы: Исследование механизма действия Диоксида хлора на вирусы, пероральный приём растворённого в воде ClO2 и его токсичность; было проведено квазиэкспериментальное исследование по пероральному применению водорастворимого Диоксида хлора для лечения больных COVID19 на 20 пациентах экспериментальной группы, в сравнении с контрольной группой из 20 других пациентов, не получавших Диоксид хлора. Результаты: Чтобы определить эффективность в экспериментальной группе по сравнению с контрольной, был проведён сравнительный тест соотношений с определенным интервалом для основных симптомов, а для критериев EVA и Likert - парный тест с использованием теста Wilcoxon-Mann-Whitney (α: 95%). При сравнении экспериментальной группы с контрольной группой, на седьмой день после проявления первых признаков заболевания было обнаружено значительное улучшение в экспериментальной группе по сравнению с контрольной по следующим симптомам: Температура (p: 0000), Кашель (p: 0,0000), Озноб (p: 0,0000) и Одышка (p: 0,0006). При проведении визуального аналогичного сравнения болевых ощущений выяснилось, что по всем пунктам, составляющим шкалу, она достоверно снизилась в экспериментальной группе по сравнению с контрольной группой (p: 0,0000; p: 00017). На 14 день зафиксированная разница была больше (p: 0,000; p: 0,0043). При оценке результатов лабораторных анализов обеих групп (контрольной и экспериментальной), была обнаружена разница для значений параметров PC Reactive на 7 день (p: 0,0001) и DH Lactate (0,0036) с более высокими баллами для экспериментальной группы; Dimero-D на 7-й день (p: 0,0194) и 14-й день (p: 0,0029); была обнаружена разница по всем параметрам. Результаты в целом (p <0,05) подтверждают гипотезу о том, что Диоксид Заключение: Диоксид хлора эффективен при лечении COVID19, и в этой работе предлагаются схемы его использования для достижения наилучших результатов. Мы рекомендуем провести дополнительные исследования. Также мы рекомендуем проводить двойные слепые исследования и подробнее исследовать токсикологическую безопасность и терапевтическую эффективность Диоксида хлора при патологиях эпидемиологического Ключевые слова: SARS-CoV-2 • COVID19 • Эффективность • Диоксид хлора. Определение эффективности лечения COVID-19 Диоксидом хлора Insignares-Carrione Eduardo 1 *, Bolano Gómez Blanca 2, Andrade Yohanny 3, Patricia Callisperis 4, Suxo Ana Maria 5, Arturo Bernardo Ajata San Martín 6 y Camila Ostria Gonzales 7 1 Директор по глобальным исследованиям Liechtensteiner Verein für Wissenschaft und Gesundheit, Liechtenstein,Швейцария (https://orcid.org/0000-0001-9337-0884) 2 Директор исследовательского отдела Fundación Génesis, Колумбия 3 Специалист по медицинской биоэтике, специалист по паллиативной помощи в онкологии, Испания 4 Директор, специалист по ортопедии и травматологии, Южная клиника, Ла-Пас, Боливия, Испания 5 Степень магистра, Учебно-исследовательский центр - Ассоциация Боливия Сегодня, эпидемиолог, Южная клиника, Ла-Пас, Боливия, Испания 6 Специалист по внутренним болезням, C Sorata 1146 Victory, Ла-Пас, Боливия, Испания 7 Ла-Пас, Боливия, Испания (linkedin.com/in/camila-ostria-gonzales-96bb0514a) * Адрес для корреспонденции: Dr. Eduardo Insignares-Carrione, директор по глобальным иссле- дованиям LVWG, iechtensteiner Verein für Wissenschaft und Gesundheit, Suiza-Liechtenstein; Эл. почта: eduardoinsignarescarrione@gmail.com / eic@lvwg.org Авторское право: © 2021 Insignares - Carrione, et al. Это статья для свободного доступа, распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроиз- ведение на любом носителе, всегда должны быть указаны оригинальный автор и источник. Получено 22 февраля 2021 г; Принято 01 марта 2021 г; Опубликовано 08 марта 2021 Введение В декабре 2019 года в китайском городе Ухане появилось новое респираторное заболевание. Источник этой инфекции был определён как новый коронавирус, родственный другим коронавирусам, которые ранее вызывали вспышки тяжелого острого респираторного синдрома (SARS) в период с 2002 по 2004 год и респиратор- ного синдрома Среднего Востока (MERS) в 2012 г. (Национальные институты здравоохранения, 2020 г.). Этот вирус получил название «коронавирус 2 тяжелого острого респираторного синдрома». (SARS-CoV-2), и заболевание, вызванное этой вирусной инфекцией, было названо "COVID-19". 11 марта 2020 г. Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ) объявила COVID-19 пандемией. Коронавирусы - это группа вирусов с оболочечной РНК, которые могут повреждать разные системы органов. Как и другие коронавирусы, вирус SARS-CoV-2 представляет собой частицу сферической формы с пиками гликопротеина на поверх- ности. Коронавирусы проникают в клетки-хозяева, область пика, известная как «рецептор-связывающий домен», связывается с ангиотензин-превращающим фер- ментом 2 (hACE2) в клетках человека. Затем вирусная мембрана сливается с мембраной клетки-хозяина, позволяя вирусному геному проникнуть в клетку-хозяин. Диоксид хлора (ClO2) был предложен в качестве потенциального средства в борьбе с COVID-19, и было проведено три клинических испытания для изучения способности ClO2 лечить COVID-19. Однако это вещество малоизвестно, многим непонятно и даже демонизируется медицинским сообществом, как мы предполагаем из-за концептуальной путаницы с гипохлоритом натрия. По этой причине мы решили проверить эффективность перорального применения Диоксида хлора при COVID-19, с помощью этого исследования, мы подробно изучили механизм действия ClO2, его профиль безопасности / токсичности и возможности его применения в борьбе с COVID-19. Цель этого исследования - определить, эффективен ли Диоксид хлора при лечении COVID-19 [1-65]. Литературный обзор Диоксид хлора (ClO 2 ) Физико-химические свойства Диоксида хлора Диоксид хлора ClO 2 в стандартных условиях представляет собой газ с хлора эффективен при лечении COVID19. воздействия в ближайшем будущем. J Mol Genet Med, Volumen 15: S2, 2021 Eduardo IC, et al. Страница 2 из 11 еще больше, делая его более устойчивым, чем другие вирусы. Примерно 70% всей поверхности белка шипа покрыто гликанами; В случае SARS-CoV-2 сахаров вдвое больше. Во-первых, потому что они стабилизируют спайк в конформации, которая позволяет ему взаимодействовать с рецепторами ACE2 в наших клетках, что инициирует инфекцию. Удалив некоторые глюканы с поверхности, белок на конце становится нестабильным, и кроме того, ослабляется связь с этими рецепторами. Один из авторов (B.Bolano) проводит исследования постковидного синдрома, акцентируя внимание на возможности того, что ClО2 действует на уровне инфламмасом или даже нетоза, как возможное объяснение улучшения постко- видного синдрома, подтверждённого сотнями врачей по всему миру. Актуальность и доказательства этих данных о противовоспалительном механизме действия ClO2 на настоящий момент не проверены. Для дальнейшего изучения механизма действия мы выбрали опубликованные статьи (pubmed, google, scholar и другие сайты), в которых описывается действие SARS-CoV-2 в клетках, его взаимодействие с hACE2, и, в частности, мы исследовали видео с дополненной реальностью или видеоролики моделирования на основе Silicon для трехмёрного представления мест действия, например, видеоролики, в которых, помимо прочего, манипулируют спикулярным белком и рецептором hACE2 с помощью программного обеспечения дополненной реаль- Точно так же мы рассмотрели структуру вирусного пика и полагались на иссле- дование Аniel Wrapp y Jason S. McLellan из the University of Texas. Трехмерное изображение спикулярного гликопротеина S бета-коронавируса. SARS-CoV-2 было обнаружено с помощью электронной криомикроскопии в рекордно короткие сроки. Благодаря этому изображению с разрешением 3,5 А подтверждается, что этот белок S связывается с белком hACE2 клеток человека с более высокой аффинностью, чем коронавирус SARS-CoV. Белок S является мишенью антител, которые поддерживают иммунитет. Его трехмёрная структура позволяет нам понять, почему известные моноклональные антитела против SARS-CoV не эффективны против молярной массой 67,45 г / моль. Обычно газ ClO2 можно получить в результате реакции между NaClO2 (хлорит натрия) и C12NaClO2 и HOCl, NaClO2 и кислотой, такой как HCl или H3PO4. Он легко растворяется в воде с растворимостью 3г/100мл https://www.vyphidroasesores.com/ Реакционная способность Диоксида хлора связана с его строением и химической связью атомов в молекуле. Диоксид хлора представляет собой изогнутую симметричную трехатомную молекулу (группа точек C2v), длина связи Cl-O составляет 147,3 пикометра, а угол связи - 117,6 градуса. (Рисунок 1A). ClO2 имеет нечётное количество электронов и 19 валентных электронов. А значит, это апарамагнитный радикал. Его электронная структура долгое время вызывала недоумение химиков, поскольку ни одна из возможных структур Льюиса не подходит для Диоксида хлора [1-10]. Теория молекулярных орбиталей показывает, что отдельный электрон занимает самую высокую незанятую молекулярную орбиталь, p*-орбиталь, что делает моле- кулу свободным радикалом и объясняет её реактивную природу. Две резонансные структуры ClO2 показаны на рисунке 1B. Резонансные структуры радикала ClO2 указывают на формы двойной связи между центральным атомом Cl и атомом O и одинарной связи в сочетании с 3-электронной связью в другой связи Cl-O. Непарный электрон распределяется между тремя атомами в двух различных резонансных струк- турах. Большая часть плотности одного электрона находится в том или ином атоме О. Это уникальное расположение обеспечивает ClO2 одним неспаренным электроном и двумя реакционными центрами (O и Cl), в которых он может реагировать. Когда Диоксид хлора растворяется в воде, большая его часть не гидролизуется: он остается в виде растворённого в воде газа. Оставшаяся часть гидролизуется и одновременно формирует Хлорит-ион (ClO 2–) и хлорат-ион (ClO 3–). Растворимость Диоксида хлора в воде на уровне моря и при 25°C приближается к 3 г / л (≈ 3000 ppm). Его растворимость увеличивается при более низких температурах. Поэтому, когда его концентрация более 3 граммов на литр, рекомендуется хранить его при температурах близких к 5°С, растворённого в чистой воде, в герметично закрытой ёмкости. В отсутствие света и при низкой температуре, он стабилен, хотя хлориды медленно катализируют его разложение на хлор и кислород. Можно ожидать, что в биологических системах ClO2 будет играть важную роль в в качестве антивирусного, антимикробного агента посредством окислительной химии. Терапевтическое действие Диоксида хлора определяется его избирательностью в отношении pH. Это означает, что эта молекула распадается и выделяет кислород, когда вступает в контакт с другой кислотой. Когда ClO2 вступает в реакцию, он становится хлоридом натрия (обычная пищевая соль) и в то же время выделяет кислород, который, в свою очередь, окисляет (сжигает) патогены (вредные микробы) присутствующие в кислой среде, превращая их в основные кислоты («зола»). Следо- вательно, когда Диоксид хлора распадается, он по тому же принципу (известному как эффект Бора), как и эритроциты (красные кровяные тельца) выделяет кислород в кровь, который является избирательным по кислотности. Аналогично эритроцитам, ClO2 высвобождает кислород в кислой среде, например в присутствии молочной кислоты, либо из-за кислотности патогена. ClO2 - противомикробный агент, селек- тивный по шкале pH. Многоклеточная ткань обладает способностью рассеивать этот заряд и не подвергается такому же воздействию. Диоксид хлора - второе по силе дезинфи- цирующее средство, известное после озона, он гораздо больше подходит для терапевтического использования, так как ClO2 способен проникать и разрушать био- логическую мембрану, что не делает озон. Большое преимущество терапевтичес- кого использования Диоксида хлора - это невозможность устойчивости бактерий к ClO2. Хотя озон сильнее в антисептических условиях, его высокий окислительный потенциал 2,07 и короткий период полураспада всего 15 минут при 25 °C со значением Антивирусная эффективность Диоксида хлора Механизм противовирусного действия ClO 2 ClO2 проявляет антивирусную активность благодаря своей окислительной способности. Вирус состоит из внешней оболочки и внутреннего ядра - нуклеиновой кислоты. Вирусная оболочка может состоять из белков, липидного бислоя и поли- сахаридов, оболочка также защищает ядро из нуклеиновой кислоты и обеспечивает селективное связывание и распознавание рецепторных клеток. Изменение или модификация вирусной оболочки или ядра (нуклеиновой кислоты) приостанавли- В случае с SARS-CoV-2 углеводная оболочка окружает и защищает его Рисунок 1: (A). Геометрия молекулы ClO2 с группой точек (C2v). Угол связи состав- ляет 117,6 O, а длина связи d составляет 147,3 пм. (В). Продемонстрированы две резонансные структуры ClO2, которые обнаруживают неспаренный электрон, с центром на атоме кислорода, разделённым между тремя атомами. вает развитие вирусной инфекции. ности ChimeraX (UCSF). SARS-CoV-2. pH 7,0 делают его менее эффективным, для терапевтического использования [11-20]. J Mol Genet Med, Volume 15:S1, 2021 Eduardo IC, et al. Страница 3 из 11 Основываясь на этой информации, мы провели исследование с доктором молекулярной биологии из Университета Tsukuba в Японии, в котором мы стремились обосновать гипотезу о том, как Диоксид хлора действует на SARS-CoV-2 (Insignares - Carrione et al, 2020 ). В результате мы увидели, что существует отличная связь между его структурой и механизмом действия. Кроме того, мы провели тестирование и других многообещающих веществ или лекарств для лечения covid19, однако, мы не получили ожидаемых результатов ни с одним из протестированных препаратов. Биоинформатика - это инструмент, который с помощью вычислительных методов обрабатывает биологические данные для изучения биологических проблем оценивая их с таких позиций, как эволюция, структура, функция и регуляция нуклеиновых кислот и белков. В своей работе в Японии мы провели анализ in silico, который имеет комплексное количественное направление, это не только даёт информацию о динамике внутриклеточных и внутримолекулярных процессов, но в конечном итоге позволяет нам предсказывать биологическое поведение на основе молекулярных взаимодействий. В этой работе мы сосредото- чили внимание на консервативных доменах, структуре, функциях и биохимических характеристиках, чтобы понять механизм действия Диоксида хлора на пик SARS-CoV-2 и РНК. (рис.2). Это комплексный количественный подход, который не только даёт информацию о Данный анализ предоставляет информацию о репликации РНК, и моделирует динамику взаимосвязи между пиком и рецептором hACE2. Исследование началось с нуклеотидной последовательности вирусной РНК, были определены открытые рамки считывания (ORF), которые после анализа показали окисление гуанина до 8-оксогуанина. Остальные базы не претерпели изменений. Аминокислоты, окисляемые Диоксидом хлора, находятся в пике, расположенном в спиралях, S1, S2, RBD и hACE2, что может объяснить почти немедленный эффект клинических улучшений, достигнутых Диоксидом хлора (Insignares - Carrione и др., 2020). Цистеин, принадлежащий к группе тиолов, является аминокислотой, которая в 50 раз более активна со всеми микробными системами, чем другие четыре аминокислоты, и, следовательно, невозможно создание устойчивости к ClO2. Гипотеза, предложенная авторами (Insignares - Carrione, 2020), заключается в том, что причину противовирусного действия Диоксида хлора при SARS-CoV-2 можно объяснить его действием как минимум на пять аминокислот (цистеин, триптофан, тирозин, пролин, гидроксипролин). Фармакокинетика Фармакокинетика ClO2 зависит от способа воздействия. Scatina et al. (1984) исследовали кожную абсорбцию препарата ClO2, нанесённого на бритую спину крыс. Максимальное поглощение Cl в плазме наблюдалось через 72 часа и была достигнута концентрация Cl в плазме 69,4 мкг%. Абсорбция происходила в течении 22,1 часа, что соответствует постоянной скорости 0,0314 ч-1 (рисунок 3). Fridyland и Kagan (1971) измерили степень абсорбции ClO2 в ротовой полос- ти людей путем полоскания рта водой, содержащей заданные концентрации ClO2, а затем измерили оставшуюся концентрацию ClO2 в смывах. Они обнаружили абсорбцию ClO2 до 30%. Безопасность / токсичность Безопасность/токсичность ClO2 зависит от способа применения, включая способ введения (например, ингаляционный, наружный или пероральный), состояние молекулы (т.е. газообразной или водной), концентрации (обычно измеряется в мг/л или ppm для водного раствора и ppm или мг / м3 для газообразного), а также рующего средства в водопроводной воде, в качестве дезинфицирующего средства для питьевой воды в местах её использования и в качестве дезинфицирующего средства для пищевых продуктов, и т. п. (Рисунок 4). токсичности ClO2. Ниже приводится обзор исследований, посвященных изучению безопасности и ClO 2 , растворенный в воде Исследования in vitro Noszticzius et al. (2013) исследовали различное воздействие ClO2 на микробы, людей или животных. Проведены исследования перфузии с использованием мембраны белка и выяснилось, что окислительный эффект ClO2 различается в зависимости от размера организма на который он воздействует. Сообщается, что ClO2 в низкой концентрации быстро убивает микроорганизмы размером с микрон, однако наносит незначительный ущерб более крупным организмам, таким как люди. Авторы предположили, что причины столь разных эффектов следующие: (1) ClO2 не может глубоко проникать в ткани более крупных организмов и (2) циркуляция более крупных организмов обеспечивает постоянное снабжение антиоксидантами, обеспечивающими защиту от окислительных последствий ClO2. рация глутатиона в эритроцитах почти полностью не истощится. (Heffernan et al. 1979a). Исследования на животных Daniel et al. (1990) подвергали крыс воздействию ClO2 с концентрацией 0,25, 50, 100 или 200 мг / л в течение 90 дней. Это соответствует дозам 11,5 мг / кг / день для мужчин и 14,9 мг / кг / день для женщин. Случаев смерти, связанных с Abdel-Rahman et al (1982b) сообщили о показателях LD50 для самок крыс от 340 до 468 мг / кг и для самцов крыс от 292 до 424 мг / кг после однократного введения через желудочный зонд. Дополнительная информация о LD50 на крысах включают 94 мг / кг (ВОЗ, 2002), 140 мг / кг (Musil et al., 1963), 292 ppm (National Institute for Occupational Safety, and Healt, 2014) и> 5000 мг / кг. (Агентство по охране окружающей среды США, 2008 г.) сообщило, что LD50 у мышей составляет более 10 000 мг / кг (Shi et al. 1999). В исследовании, проведенном в Университете Querétaro (Мексика) в 2020 году, исследователи проверили гипотезу о том, что ClO2 снижает вирусную нагрузку и смертность от вирусов у позвоночных. Для этого они определили Рисунок 2: Положения аминокислоты (цистеина) в структуре пика, одного из возможных мест действия ClO2. Рисунок 3: Исследования in vitro показали, что метгемоглобин не образуется пока концент- воздействием, не было. динамике внутриклеточных и внутримолекулярных процессов, но и, в конечном счете, позволяет предсказывать биологическое поведение на основе молекулярных взаимо- действий. продолжительность воздействия. Газ ClO2 токсичен при гораздо более низких концентрациях, чем водный ClO2. Токсичность также увеличивается с увеличением продолжительности воздействия. Тот факт, что ClO2 менее токсичен в водной форме, позволяет использовать эту молекулу в качестве безопасного дезинфици- Эффективность действия Диоксида хлора в зависимости от концентрации и времени воздействия. J Mol Genet Med, Volume 15:S1, 2021 Eduardo IC, et al. Страница 4 из 11 вирусную нагрузку, вызванную вирусом, и смертность 10-дневных куриных эмбрионов, с привитым 104 EID50 / мл в среде с ослабленным штаммом птичьего коронавируса (IBV) из Massachusetts и Connecticut. Лечение ClO2 оказало заметное влияние на инфекцию IBV. В частности, титры вирусов были в 2,4 раза ниже, а смертность снизилась вдвое у инфицированных эмбрионов, обработанных ClO2. Инфекция вызвала развитие аномалии независимо от лечения. Типичные поражения инфекций IBV наблюдались во всех инокулированных эмбрионах, но степень тяжести, как правило, была значительно ниже в эмбрионах, обработанных ClO2. Они не обнаружили никаких макроскопических или микрос- копических признаков токсичности, вызванной ClO2 в дозах, применённых в этом случае. В исследовании делается вывод, что ClO2 мог бы стать безопасным и эффективным способом лечения и смягчения последствий птичьих коронавируc- Водорастворимый Диоксид хлора (CDS) у людей и исследования на животных Исследования Lubbers et al. (1982, 1984а) на медицинском факультете из Университета штата Огайо оценили краткосрочную токсичность внутреннего приёма ClO2. В первом исследовании (Lubbers et al., 1982) принимала участие группа из 10 человек, здоровые взрослые мужчины выпили 1000 мл (разделив на две порции по 500 мл каждые 4 часа) постепенно увеличивающейся дозы ClO2. Исследование включало серию из шести проб по 3 дня каждая, в которых испытуемые пили 0,1, 1,0, 5,0, 10,0, 18,0 и 24,0 мг/л раствора ClO2. (0,34 мг / кг при исходной массе тела 70 кг). Во втором исследовании (Lubbers et al., 1984a) группы из 10 взрослых мужчин получали 500 мл дистиллированной воды, содержащей 0 или 5 мг / л ClO2 (0,04 мг / кг в день, если исходная масса 70 кг) в течение 12 недель. В сравнительном исследовании сверхчистого Диоксида хлора с двумя ирригантами относительно жизнеспособности стволовых клеток периодон- тальной связки (PLDSC), эксперименты по жизнеспособности клеток проде- монстрировали, что применение ClO2 не приводит к значительному снижению жизнеспособности PLDSC, и в используемых концентрациях убивает только микробы, Материалы и методы чем отличается от традиционных ирригаций H2O2 и CHX, которые очень токсичны в PDLSC. Старение культур PLDSC (от 3 до 7) оказывает характерное влияние на их реакцию на эти вещества, поскольку снижает повышенную экспрессию маркеров мезенхимальных стволовых клеток. Они пришли к выводу, что есть активные Пероральный прием ClO , растворённого в воде. 2 Единственное исследование, проведенное с использованием водораст- воримого ClO2 (CDS) перорально - это наше настоящее исследование, проведённое в рамках испытания в многочисленных клиниках различных стран Центральной и Южной Америки (https://Clinicaltrials.Gov/ct2/show/ NCT0434374). Статистика Боливии, где использование водорастворимого ClO2 для профилактики и лечения COVID-19 было одобрено законом в начале августа 2020 года, демонстрирует заметное сокращение случаев заболевания и смертности в этой стране. Самый высокий показатель, зарегистрированный в Боливии, был на 29-й эпидемиологической неделе (10939 случаев), а на 45-й эпидемиологической неделе количество случаев снизилось до 670 (что пред- ставляет 4,5% на 36 эпидемиологической неделе, что совпадает с массовым использованием Диоксида хлора населением, но при этом нельзя с уверен- ностью утверждать, что Диоксид хлора стал причиной этого уменьшения. (https://snis.minsalud.gob.bo/). С пикового значения 2031 ежедневного случая 20 августа 2020 года количество случаев снизилось до 147 ежедневных случаев октября 2020 года, что на 93% меньше. Ежедневная смертность снизилась со 132 - 3 сентября 2020 г. до 24 - 21 октября 2020 г. Несмотря на то, что с 49 до 53 эпидемиологической недели наблю- дался рост числа случаев, смертность оставалась относительно низкой. Часть врачей из нашей исследовательской группы (в Боливии более 220 врачей), сообщили, что население снизило потребление Диоксида хлора, и это может быть возможным объяснением пика, но увеличение потребления ClO2 вернуло пик до предыдущего уровня, поддерживая снижение сравнительной смертности (Рисунок 5). Таким образом, в то время как в других странах пик остался, в Боливии - снизился, вероятно в результате профилактических мер, массового употребления Диоксида хлора и методов традиционной медицины. Доза Исследования in vitro и in vivo показывают, что низкие дозы ClO2, растворённые в воде обладают мощным и быстрым противовирусным действием против широкого спектра вирусов. В исследовании питьевой воды в Нидерландах, Jin et al. (2013) обнаружили, что обработка ClO2 в концентрациях 0,5 частей на миллион в течение 25 минут, 1,5 частей на миллион в течение 10 минут или 2 частей на миллион в течение 5 минут приводила к снижению уровня энтеровируса как минимум на 4 log. Schijven et al (2019) показали, что водопроводная вода, обработанная ClO2 (0,1 ppm летом и 0,05 ppm зимой), значительно снижает количество аденовируса до показателей, признанных безопасными для питьевой воды. Álvarez y O'Brien (1982) обнаружили, что концентрация ClO2 40 ppm, добавленная в сточные воды, засеянные SARS-CoV, полностью дезактивировала SARS-CoV через 30 минут. Доза, используемая в этом исследовании, составляет 30 мг в день в течение 21 дня, что значительно ниже NOAEL или, в худшем случае, равна NOAEL, о которой сообщалось в предыдущих исследованиях на животных, о чём мы писали выше. Рисунок 4: Обзор экспериментальных уровней системной токсичности Диоксида хлора/хлорита. Синим цветом обозначены контрольные уровни для дезинфекции питьевой воды (US-EPA); а зеленым, уровни с доказательством терапевтической эффективности при нулевой токсичности (ссылки A. Kalcker и E. Insignares Carrione); красным: минимальные уровни токсичности, обнаруженных в различных исследованиях in vivo на животных и людях. ных инфекций и имеет высокую вероятность того, что аналогичные эффекты могут наблюдаться в других организмах. (Xóchitl Zambrano-Estrada et al, 2020). компоненты в жидкости для полоскания рта (H2O2). Для того чтобы найти максимум научной информацию о Диоксиде хлора, J Mol Genet Med, Volume 15:S1, 2021 Eduardo IC, et al. Страница 5 из 11 был проведён поиск в Google, Scholar, PubMed (Medline), LILACS, Cochrane Library, Science, Scielo, MedScape, статей на английском и испанском языках, содержащие поисковые запросы по Диоксиду хлора, Вирус, SARS -CoV-2, коро- навирус, окислитель, очистка воды, «Диоксид хлора» или «Протокол Диоксида хлора», о Диоксиде хлора и вирусе; Диоксид хлора и SARS-COV-2; или "лечение COVID-19, пик гликопротеина «О», синдром «О» вируса COVID-19 тяжелый острый респираторный коронавирус 2 " или "COVID-19" или "2019-nCoV" или "SARS-CoV-2" или "Новый коронавирус 2019 г." или "Коронавирусная болезнь 2019 г." или (пневмония). Кроме того, был выполнен поиск в Google с использованием тех же поиско- вых запросов. Статьи, отобранные для включения в обзор, состояли из публикаций, касающихся потенциального использования ClO2 в качестве профилактики COVID-19, о положительных аспектах и возможных последствиях вредного воздействия или токсичности вещества. Все найденные статьи были проверены, и для дальнейшей оценки было выбрано множество соответствующих рефератов. Затем был произведён поиск библиографий этих статей для получения дополни- тельных ссылок. Все материалы состояли из статей, которые позволяют изучить использование, химию, токсичность, противомикробный и вирулицидный эффект, предыдущие исследования на животных in vitro и in vivo, а также исследования с людьми зарегистрированные на сайте clinicaltrials.gov и WHO International Clinical) Из результатов поиска мы выбрали те, которые описывали вирулицидное действие Диоксида хлора на различные микроорганизмы, в частности на вирусы, включая SARS-CoV-2 или SARS-CoV. С другой стороны, мы выбирали статьи, раскрывающие действие SARS-CoV-2 в клетках при его взаимодействии с ACE2 и, в частности, мы исследовали видео с дополненной реальностью или видео-симуляторы на основе in Silico, для трехмерного представления. Также были изучены видеоролики, в которых спикулярный белок и рецептор ACE2 (37) управляются, среди прочего, с помощью программного обеспечения дополненной реальности ChimeraX (UCSF). Точно так же мы рассмотрели структуру пика вируса описанную в исследовании Daniel Wrapp y Jason S. McLellan из Университета Техаса, информацию, с помощью которой в параллельном исследовании мы смогли выдвинуть гипотезу о механизме действия Диоксида хлора на SAR-CoV-2. Имея информацию, необходимую для вывода о том, что Диоксид хлора был эффективен и что его использование в пандемии COVID19 становится огромной возможностью контролировать её на основе научных данных, выявленных в предыдущих исследованиях, и, прежде всего, того, что он безопасен для людей, в итоге мы приняли решение о проведении исследования для определения эффективности СlO2 при пероральном приеме для лечения COVID19. Мы решили провести IIa фазу, для того чтобы проверить существовует ли возможноть быстрого, эффективного и недорогого варианта лечения, который можно было бы быстро внедрить во всем мире, для этого мы выбрали квазиэкспериментальное клиническое исследование. NCBI (Национальный центр биотехнологической информации) баз данных Medline и Pubmed недавно одобрил концепцию ECE (Квазиэкспериментальные исследования) под термином MeSH «Нерандомизированные контролируемые испы- тания как тема» (NCBI, 2015). После создания протокола исследования было решено зарегистрировать его в Clinicaltrials.gov, который был принят 7 апреля 2020 года под номером NCT 04343742. Проект был создан международным мультицентром, таким образом, чтобы можно было быстро собрать данные, а в будущем увеличить их и сделать более представительными. Тот же протокол был представлен на одобрение в 11 стран американского континента и в Испании. К сожалению, органы по контролю над наркотиками во всех странах сделали предупреждения и даже запреты на его использование для употребления в пищу, что затруднило одобрение протокола комитетами по этике. В Боливии был принят Закон No 1351 от 2020 г. разрешающий разработку, коммерциализацию, поставку и использование раствора Диоксида хлора CDS для профилактики и лечения в условиях пандемии коронавируса (COVID 19); комитет по этике, одобренный Министерством здравоохранения Боливии, утвердил этот многоцентровый исследова- тельский протокол международного масштаба, ретроспективный, интегрированный пятью (5) университетами (Технический университет Oruro, Государственный университет El Alto, Университет Mayor de San Simón, Автономного Университета Gabriel René Moreno и технического института Yacuiba "Gran Chaco"), которые, в свою очередь, в своих коми- Сбор и запись данных Сбор и запись данных осуществлялись путем регистрации демографических и симптоматических данных на основе визуально-аналоговой шкалы (EVA) и лабора- торных параметров,по шкале Лайкерта для лучшей оценки и сопоставимости. Таким образом, инструменты или форматы были построены и записаны в программном обеспечении, специально разработанном для исследования со следующими характеристиками: Электронная форма была специально разработана в среде WEB для регистрации информации, необходимой для исследования, через ПК, смартфоны и планшеты. Приложение было разработано компанией SCORPII SAS в 2020 году, и имеет следующие функции: • Запись контактной информации и основного профиля врача исследователя, местонахождение медицинского центра, в который пациент впервые обратился а также его контактные данные и социокультурный профиль. Файл информированного согласия на использование исследуемого вещества, подписанный каждым пациентом. Регистрация информации первичного диагностического анамнеза пациента. Запись последующего клинического анамнеза пациента в отношении симптомов, шкала оценки болеавых ощущений (EVA) и оценки лабораторных отчётов по шкале Лайкерта на 0, 7, 14 и 21 день. Что касается безопасности, то в приложении отсутствует возможность вносить изменения или корректировку, что гарантирует подлинность, целостность и конфиденциальность информации. Каждый исследователь имеет доступ к приложению, подтвердив свой адрес электронной почты и пароль, таким образом, что они несут исключительную ответственность за регистрацию информации о каждом из своих пациентов. Создание сводных отчетов для статистического анализа, функция доступа • • • • • Рисунок 5: Смертность от коронавируса в Латинской Америке. тетах по научным, этическим и клиническим исследованиям проводят собственные иссле- дования Диоксида хлора для его использования в различных областях [ 20-35]. Registry Platform (ICTRP). J Mol Genet Med, Volume 15:S1, 2021 Eduardo IC, et al. Страница 6 из 11 исключительно для директора по исследованиям, без возможности изменения базы данных записей, подготовленных врачами исследователями. Таким образом эти инструменты позволили собрать и зарегистрировать результаты проведения семиологических, клинических и лабораторных обследований в начале исследуемого лечения экспериментальной группы и контрольной группы, на 7, 14 и 21 день. Помимо демографических сведений, регистрируются следующие данные: Семиологические: красные глаза, лихорадка, кашель, мокрота, астения / адинамия, озноб, рвота, одышка, заложенность носа. Критерии по VAS (визуальной аналоговой шкале или EVA) представляют собой прямую линию, в которой одна крайность означает отсутствие боли, а другая крайность означает наихудшую боль, которую только можно вообразить. Пациент отмечает точку на линии, которая соответствует количеству боли, которую он испытывает. Также регистрировались: боль в горле, головная боль, боль в груди, общие мышечные боли, боли в пояснице. Критерии Лайкерта (шкала Лайкерта — это порядковая шкала с использова- нием 5 уровней) сгруппированные параклинические экзамены. Исследовались: лимфоциты, лейкоциты, тромбоциты, C-реактивный белок, лактатдегидрогеназа, AST, D-димер и лактат в оксиметрии. Приборы позволяли собирать и фиксировать результаты проведения семиологических обследований, оценка болезненных симптомов (EVA) и лабораторных (LIKERT) в начале исследуемого лечения (или исходный уровень) а также на 7, 14 и 21 день. Анализ и интерпретация данных Осуществлялась по вышеперечисленным показателям, при поддержке программно- го обеспечения IBM - SPSS Statistics; Данные экспериментальной и контрольной групп, общие симптомы анализировали с помощью теста сравнения пропорций и их доверительных интервалов, и по критериям EVA и Лайкерта с помощью пар- ного теста с использованием критерия Wilcoxon-Mann-Whitney. α: 95%). Население Экспериментальная популяция, на которую было направлено многоцентро- вое исследование, состояла из группы пациентов с активной инфекцией COVID-19, в нескольких медицинских центрах в Боливии (14 пациентов), большинство из них в Южной клинике Ла-Пас, Боливия, Перу (два пациента) и Эквадоре (четыре пациента), всего двадцать (20) пациентов. Контрольная популяция состояла из восьми (8) пациентов из Эквадора, семи (7) пациентов из Боливии, трех (3) из Мексики и двух (2) из Перу, в общей сложности двадцать (20) пациентов. Пациенты Отбор пациентов в лечебную или экспериментальную группу производился среди больных с активной инфекцией COVID19, обнаруженной с помощью поло- жительного теста ПЦР, имеющих симптомы от 3 до 7 дней которые не про- ходили, им было предложено стать добровольцами. Пациенты контрольной группы отказались от лечения Диоксидом хлора. Все пациенты обратились за помощью сразу же, после того как произошло заражение. Вирусная нагрузка не определялась из-за затрат, технических и логистических трудностей референс-лабораторий в Мексике, Боливии, Перу и Эквадоре. Количество пациентов Двадцать пациентов (n = 20) для экспериментальной группы и 20 пациентов (n = 20) для контрольной группы были включены в исследование. Отношения один к одному для каждого центра не поддерживались, и они были представлены случайным образом в соответствии с вероятностным планом выборки. Критерии приёма в исследование Были использованы следующие критерии включения: Covid 19 RT-PCR положительные, характерные симптомы Covid-19: лихорадка, одинофагия, затруднение дыхания, возраст от 18 до 80 лет. Критерий исключения Covid 19 RT-PCR отрицательный, IV / VI почечная недостаточность, застойная сердечная недостаточность, пациенты, принимающие антикоагулянты, в частности Продолжительность лечения на пациента Период наблюдений за пациентами в экспериментальной группе составлял 21 день, а в контрольной 14 дней. В экспериментальной группе осмотр проводился на 1-й 7-й, 14-й и 21-й день, а в контрольной на 1-й, 7-й и 14-й день. После 22 дня наблюдений не проводились ни в экспериментальной ни в контрольной группах. Важно отметить, что научные сотрудники продолжали наблюдение за большинством пациентов до полного исчезновения симптомов в обеих группах. В качестве эмпирического наблюдения исследователи сообщили, что пациенты которые употребляли Диоксид хлора для лечения COVID19, значительно меньше имели постковидных симптомов по сравнению с пациентами не принимавшими Диоксид хлора. Общая продолжительность исследования Исследование началось в июле 2020 года и завершилось в декабре 2020 года. Назначение исследуемого препарата Каждый пациент получил в порядке включения в исследование последова- тельный номер пациента (выбраны нечетные числа), и соответствующее иссле- дуемое лекарство. Распределение этого препарата производилось до начала исследования с использованием компьютерного списка флаконов, разработанного для целей исследования. Пациенты получали препарат на основе Диоксида хлора в 3000 ppm, который производился электролизом на оборудовании для производс- тва сверхчистого Диоксида хлора, торговая марка Мedalab www.medalab.com с точными письменными инструкциями по приготовлению, приёму и хранению растворов. Химики исследовательской группы контролировали стандартизацию воды, исполь- зуемой для приготовления Диоксида хлора, до 3000 частей на миллион, а также воды, используемой для разбавления и питья; тщательно контролировались условия и характеристики процесса приготовления, стандартизованные характеристики контейнера, использование стандартизированного 28% хлорита нат- рия Merck, стандартизованная стерильная бидистиллированная вода, забуференная при pH 7 и концентрация Диоксида хлора 3000 ppm. Контрольная группа получала противовоспалительное лечение (ибупрофен в дозе 200-400 мг каждые 8 часов), антибиотики (азитромицин 500 мг ежедневно в течение 5 дней), антигистаминные препараты (гидроксизин х 5 мг каждые 12 часов), кортикостероиды (обычно 40 мг метилпреднизолона каждые 12 часов в течение 3 дней, а затем по 20 мг каждые 12 часов в течение 3 дней) и меры поддержки. Экспериментальная группа не получала такого лечения. Дозировка и способы применения Используемое лекарство - Диоксид хлора 3000 ppm во флаконах объёмом 120мл. с отмеченными частями на этикетке которое принималось согласно стандарту установленого в протоколе исследования. Используемые протоколы применения Диоксида хлора: Начальный протокол, загрузка, или протокол (F): В 1 литре воды развести 10 мл Диоксида хлора (3000 ppm) и, разделив содержимое на 8 равных частей принимать в течение 2 часов. Протокол поддержки (C): Развести 10 мл Диоксида хлора 3000 ppm в 1 литре воды и, разделив его на десять (10) доз, пить каждый час в течение дня. Препарат принимают внутрь не менее чем за 60 минут до или после еды. Не было остатка и недостатка лекарств, но было строгое соблюдение протокола лечения. Бросивших лечения не было. Результаты Предварительный анализ параметров на начало исследования Характеристики пациентов экспериментальной группы на момент поступления, варфарин натрия. J Mol Genet Med, Volume 15:S1, 2021 Eduardo IC, et al. Страница 7 из 11 после проверки положительного результата RT-PCR, были получены следующие данные: По полу: 13 пациентов мужского пола (65%) и 7 женщин (35%). Возрастной диапазон от 36 до 72 лет. Средний возраст мужчин - 47,6 года, женщин - 58 лет. Средний возраст - 53,2 года (рисунок 6) Параллельный инструмент был разработан для регистрации возможных по- побочных эффектов Диоксида хлора, где помещаются данные каждого пациента и процесс их соблюдения. Через 7 дней у двух пациентов зарегистрировано легкое ощущение гастрита однако это было временным, разрешившееся без вмешатель- ства и не требующее приостановку прие